浅盘凝集试验
浅盘凝集试验(tray agglutination test,TAT)
【准备】
(1)配制 Baker液。
(2)用 Baker液配 10% BSA。
(3)洁净浅盘(或微量反应板)。
(4)精子悬浮液:将精液分装于 2~ 3支小试管内,其面叠加 10% BSA 0.5mL,放置 37℃1h,收集上层精子,用 Baker液调整精子浓度为 40×106/mL。
(5)将待检及对照血清作灭活补体处理(56℃ 30min),然后把血清进行 1∶4~ 1∶32对倍稀释。
【方法】
(1)浅盘孔上加液状石蜡覆盖,分别以微量加样器把 5μL血清及 1μL精子悬液注入浅盘孔的底部,并用小型振荡器使其充分混合。
(2)放 37℃ 1h或室温(25℃ )4h温育。
(3)用倒置显微镜,观察结果。低倍镜(40× ,100× )看凝集总体情况,高倍镜(200× ,400× )观察凝集型。
【判断】
(1)阳性:1∶8以上血清稀释度有明显的精子凝集块。
(2)阴性:精子呈分散自由活动,无凝集块。
(3)凝集强度:精子全部或≥75% 凝集记" + + + ";
精子有≥50% 而≤75% 凝集,且有较大的凝集块记" + + ";
精子有≤50% 凝集,凝集块小而分散记" + "。